STERILISASI EKSPLAN

Dari semua sumber kontaminasi, kontaminasi dari bahan tanam/eksplan merupakan yang paling sulit diatasi. Untuk itu diperlukan bahan sterilan yang tepat untuk menghilangkan kontaminan dari eksplan.
Kontaminan hidup dapat berupa cendawan, bakteri, serangga dan telurnya, tungau serta spora. Bila kontaminan ini tidak dihilangkan, maka pada media yang mengandung gula, vitamin dan mineral, dalam waktu singkat seluruh botol terpenuhi oleh kontaminan yang akhirnya mengakibatkan eksplan menjadi mati.

Sterilisasi eksplan dengan bahan sterilisasi adalah sebatas membersihkan debu, cendawan, bakteri dan kontaminan lain dari bagian permukaan eksplan atau disebut desinfestasi.

1) Macam-macam bahan sterilisasi dan fungsinya
Macam-macam bahan sterilisasi dan fungsinya tersaji pada Tabel 1.

Macam-macam Bahan Sterilisasi dan Fungsinya

No Nama Bahan Sterilisasi Fungsi
1. Deterjen Membersihkan kotoran/debu dari eksplan
2. Fungisida Membersihkan jamur/cendawan
3. Bakterisida Membersihkan bakteri
4. Alkohol 70 % dan 95 % Desinfektan
5. Sodium hipoklorik
dengan nama dagang
clorox atau bayclin Desinfektan
6. Mercury chlorit dengan
nama dagang sublimat 0,05 % Desinfektan
7. Tween-20 Agen pembasah
8. Antibiotik Desinfektan
9. Iodine/betadine Antiseptik



2) Memilih bahan sterilisasi
Dalam melakukan sterilisasi eksplan, pemilihan metode sterilisasi harus selektif, termasuk dalam hal ini adalah memilih bahan sterilisasi yang tepat.
Setiap bahan tanam mempunyai tingkat kontaminan permukaan yang berbeda, tergantung dari :
a) Jenis tanaman
b) Bagian tanaman yang dipergunakan
c) Morfologi permukaan (misalnya : berbulu atau tidak)
d) Lingkungan tumbuh (green house atau lahan)
e) Musim waktu mengambil (musim hujan/kemarau)
f) Umur tanaman (seedling atau tanaman dewasa)
g) Kondisi tanaman (sakit atau sehat)

Untuk itu tidak ada prosedur sterilisasi yang standar yang harus diperhatikan dalam sterilisasi bahan tanam, yang terpenting adalah bahwa kontaminan harus dihilangkan tanpa mematikan sel tanaman. Dalam memilih bahan sterilisasi untuk bahan tanam perlu diketahui apakah kontaminan berupa kontaminan eksternal atau kontaminan internal. Pada bahan tanam yang mengandung kontaminan eksternal dapat dipilih bahan sterilisasi yang dapat membersihkan permukaan luar bahan tanam, sedangkan pada bahan tanam dengan kontaminan internal yaitu kontaminan yang berasal dari jaringan tanaman itu sendiri, maka perlu diberi perlakuan antibiotik atau fungisida sistemik.

3) Prosedur sterilisasi eksplan dengan cara dibakar
Tidak semua jenis eksplan dapat disterilisasi dengan cara dibakar. Eksplan yang dapat disterilisasi dengan cara dibakar adalah eksplan yang terbungkus oleh jaringan luar misalnya pelepah, daging buah, atau kulit luar yang sangat tebal. Dengan demikian eksplan yang dibakar, bagian dalamnya tidak rusak atau mati. Contoh eksplan yang dapat disterilisasi dengan cara dibakar adalah buah anggrek, bonggol pisang, biji jarak, dan lain-lain. Pembakaran eksplan jaringan jangan sampai merusak eksplan.

Prosedur sterilisasi eksplan dengan cara dibakar adalah eksplan dicelupkan kedalam alkohol absolut, eksplan dibakar pada api lampu bunsen,dan eksplan siap diinokulasi.

4) Mensterilkan eksplan dengan cara merendam bahan kimia
Pada dasarnya semua jenis eksplan dapat disterilisasi dengan menggunakan bahan kimia. Hanya saja perlu diperhatikan konsentrasi larutan bahan kimia yang digunakan serta lamanya perendaman. Keras lunaknya eksplan berpengaruh terhadap penggunaan konsentrasi larutan dan lamanya perendaman. Eksplan yang lunak sebaiknya menggunakan konsentrasi bahan kimia yang rendah dan waktu yang tidak terlalu lama. Sebaiknya pada eksplan yang keras, dapat digunakan konsentrasi yang lebih tinggi dan waktu perendaman yang lama.

Prosedur sterilisasi eksplan dengan cara merendam dalam bahan kimia adalah eksplan dicuci dengan deterjen dan dibilas air bersih,eksplan direndam dengan fungisida, eksplan dicuci dengan aquades steril, eksplan direndam dalam larutran antiseptik, dan eksplan siap diinokulasi.